lip2000高效DNA TR #RL0401

lip2000高效DNA TR是一种新型的阳离子脂质体转染试剂适合于将核酸DNA转染入真核细胞，  具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

lip2000高效DNA TR转染试剂对于 常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、  操作简单、无明显的细胞毒性 ，并且对于贴壁细胞和悬浮 细胞都适用。

lip2000高效DNA TR主要适用于DNA 等单一成分的细胞转染。

lip2000高效DNA TR转染过表达质粒后，通常 24-48 h 后达到较高的蛋白表达水平， 并且很  多情况下蛋白表达量在转染后 48 h 显著高于转染后 24 h；

lip2000高效DNA TR转染细胞时， 基   本不受细胞培养液中血清影响， 即可以在血清存在的情况下  进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用

不含抗生素培养液。转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染 4-6 h 后可去除转染液。

使用方法

一、DNA 转染

对大多数细胞来说， DNA(μg)与lip2000高效DNA TR (μl) 的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染 效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1. 以24孔板为例

贴壁细胞：转染前一天，用500μl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到80-90%融合。

悬浮细胞：在准备DNA-TRLIP2000DNA复合物之前，用500μl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。

2. 对每个转染样品，进行以下操作

a.在eppendorf管里分别加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和0.8μgDNA轻柔混匀（不能涡旋或离心），制成DNA稀释液。

b.在另一个eppendorf管里分别加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和2.0μllip2000高效DNATR(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制成lip2000高效DNATR稀释液，室温静置5分钟。

c.将DNA稀释液和lip2000高效DNATR稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-lip2000高效DNATR复合物。DNA-lip2000高效DNATR复合物在室温下可稳定存在6小时。

3. 将DNA-lip2000高效DNATR复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。

如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

优化 DNA 转染

质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细 胞毒性的影响， 可以对DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及细 胞密度进行优化， 一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA   (μg)和lip2000高效DNA TR (μl) 的比例。

不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及lip2000高效DNA TR用量

注意事项

1. 使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备不含抗生素的无血清培养液或 Opti-MEM®培养液 或普通的 DMEM 培养液。
4. lip2000高效DNA TR转染试剂不能vortex 或离心，宜缓慢晃动混匀。
5. 转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露空气中。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见细胞的lip2000高效DNA TR转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别）

Lip转染试剂用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）

*4℃保存，一年有效（避免冷冻）。