产品概述
本产品为便捷无缝克隆试剂盒。试剂盒中包含优化的2× Easy clone连接预混液、pUC19 control vector(linearized,Amp +) 及500 bp control insert。基于载体和PCR片段末端的同源序列完成单片段或多片段无缝克隆重组，阳性率可达95%以上，是一款便捷、快速、高效的克隆试剂盒。其中2× Easy clone连接预混液经优化后同时适用于平末端和粘性末端连接，5min即可完成单片段或15min完成多片段重组。
产品优势
便捷：5min可完成单片段克隆重组/15min可完成多片段克隆重组
高效：菌落数多，阳性克隆率可达95%以上
灵活：可随意选择目的片段插入位置
产品组成
操作流程
Ø重组克隆
1.根据实验需求提前制备线性化载体和插入目的片段。
2.按照载体和片段大小计算合适的加入量：
1) Linearized Vector使用量可根据实际载体大小在50 ng- 200 ng 范围内进行调整，最适加入量计算方法如下：
克隆载体使用量 = [0.02×克隆载体碱基对数] ng
2) 单片段克隆的片段使用量推荐20 ng-200 ng，片段的最适加入量可根据以下方法计算：
插入片段使用量 = [0.04×插入片段碱基对数] ng
3) 多片段克隆的片段使用量推荐10 ng-200 ng，片段的最适加入量可根据以下方法计算：
各片段加入量 = [0.02×克隆载体碱基对数] ng
注：无论是单片段克隆或多片段克隆，当计算的最适加入量小于推荐的最小加入量时，直接按照推荐的最小加入量添加
3.于冰上配制反应体系：
用移液枪吹打混匀反应体系，50℃ 5 min进行重组。反应结束立即冰上冷却。
Ø感受态细胞转化
1. 取出感受态细胞置于干冰上，待细胞融化后混匀细胞，10 µl重组产物中加入100 µl感受态细胞。冰上静置30 min。
2. 42℃ 45 sec进行转化，立即置于冰上冷却2-3 min。取900 µl LB培养基（不添加抗生素）置于15 ml离心管，加入完成转化的细胞混合液，37℃摇菌1 h(转速200–250 rpm)。
3. 5,000 rpm(2,400×g)离心5 min，弃去900 µl上清培养基，用余量培养基重悬剩余菌体。
4. 用无菌涂布棒在对应抗性培养基上涂布。
5. 37℃培养箱中倒置培养12-16 h。12-16 h后，平板上可见数个经重组反应的单克隆，挑取若干个克隆进行菌落PCR鉴定。
实验案例
